細(xì)胞的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)有哪些方法
CCK-8實(shí)驗(yàn)
全稱為Cell Counting Kit-8,在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶還原成水溶性的甲臜染料,生成的(橙黃色)甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比,即顏色的深淺與細(xì)胞的增值成正比。因此可以用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
MTT
MTT全稱 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽, 活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。對(duì)于細(xì)胞樣本加入MTT試劑反應(yīng),形成甲臜結(jié)晶。隨后加入二甲基亞砜(DMSO)重新溶解細(xì)胞中的甲臜,得到紫色混合液。用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值。細(xì)胞存活率=(實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白組吸光度值)/(對(duì)照組吸光度值-空白組吸光度值)*100%。
兩者區(qū)別
加入CCK-8后活細(xì)胞生成的具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物,由于其毒性較小,需要摸索檢測(cè)時(shí)間,而加入MTT后活細(xì)胞生成的為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚
CCK-8對(duì)細(xì)胞毒性較小,這也是與MTT區(qū)別較大的地方。
對(duì)于懸浮細(xì)胞來說,建議使用cck8法,因?yàn)镸TT檢測(cè)的是細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì),加入MTT4h以后,需要先將MTT吸出,再加DMSO溶解,這一步驟容易造成很大誤差,CCK8法可以規(guī)避這一風(fēng)險(xiǎn)。
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